Hur mycket kostar det att transformera en ligation?

2024 Författare: Miles Stephen | [email protected]. Senast ändrad: 2023-12-15 23:40

Omvandling . Tillsätt mellan 1-5 µl av ligering blandning till kompetenta celler för omvandling . Förlängd ligering med PEG orsakar ett drop-off in omvandling effektivitet (Snabb Ligering Utrustning). Elektroporering rekommenderas för stora konstruktioner (>10 000 bp).

Härav, hur mycket ligeringsprodukt behöver jag för transformation?

Omvandling . Tillsätt mellan 1-5 µl av ligering blandning till kompetenta celler för omvandling . Förlängd ligering med PEG orsakar ett drop-off in omvandling effektivitet (Snabb Ligering Utrustning). Elektroporering rekommenderas för stora konstruktioner (>10 000 bp).

Därefter är frågan, vad är Ligation och transformation? I ett typiskt kloningsexperiment sätter forskare först in en bit DNA, såsom en gen, i en cirkulär bit av DNA som kallas en plasmid. Detta steg använder restriktionsenzymer och DNA-ligas och kallas en ligering . Efter en ligering , är nästa steg att överföra DNA:t till bakterier i en process som kallas omvandling.

Därefter kan man också fråga sig, hur mycket DNA behövs för en ligering?

Den totala koncentrationen av vektor + infogning bör vara mellan 1-10 Μg/ml för effektiv ligering . Vektor: Molära förhållanden mellan 1:1 och 1:10 rekommenderas (1:3 är typiskt). Om du är osäker på din DNA koncentrationer, utför flera ligeringar med varierande förhållanden.

Hur länge kan man lagra en ligationsreaktion?

Ligationer kan göras i rumstemperatur eller svalare (tänk 12-16°C) över natten eller till och med under några dagar, om du är verkligen upptagen. Du kan också lagra en ligation i kylen och ta ut den senare för att fortsätta ligera i rumstemperatur så länge lång som nödvändigt.