Hur beräknas DNA-koncentrationen med spektrofotometer?
Hur beräknas DNA-koncentrationen med spektrofotometer?

Video: Hur beräknas DNA-koncentrationen med spektrofotometer?

Video: Hur beräknas DNA-koncentrationen med spektrofotometer?
Video: DNA concentration 2024, November
Anonim

DNA-koncentration är uppskattas av mäter absorbansen vid 260nm, justerar A260 mätning för grumlighet ( mätt med absorbans vid 320 nm), multiplicerar förbi utspädningsfaktorn, och använder sig av förhållandet som en A260 av 1,0 = 50 pg/ml rent dsDNA.

Folk frågar också, hur hittar du koncentrationen och renheten av DNA?

Att utvärdera DNA-renhet , mät absorbans från 230nm till 320nm för att upptäcka andra möjliga föroreningar. Den vanligaste renhetsberäkning är förhållandet mellan absorbansen vid 260 nm dividerat med avläsningen vid 280 nm. Bra kvalitet DNA kommer att ha ett A260/A280 förhållandet 1,7–2,0.

Likaså, vad är en bra DNA-koncentration? A Bra kvalitet DNA provet ska ha ett A260/A280 förhållandet 1,7-2,0 och ett A260/A230 förhållandet större än 1,5, men eftersom känsligheten hos olika tekniker för dessa föroreningar varierar, bör dessa värden endast ses som en vägledning för renheten hos ditt prov.

Angående detta, hur beräknar NanoDrop DNA-koncentrationen?

Du multiplicerar absorbansvärdet vid 260 nm med en fast faktor (det är 50 för DNA ) och du får DNA-koncentration . Voilá. (Ok, det är tekniskt sett A260 av ett 10 mm tjockt prov som multipliceras med 50; NanoDrop uttrycker A260 som om provet var 10 mm tjockt, som i en standardkyvett).

Varför var vi tvungna att använda en spektrofotometer för att kvantifiera vårt DNA?

A spektrofotometer är kunna bestämma de genomsnittliga koncentrationerna av nukleinsyrorna DNA eller RNA som finns i en blandning, såväl som deras renhet. Använder sig av Beer-Lambert-lagen det är möjligt att relatera mängden absorberat ljus till koncentrationen av den absorberande molekylen.

Rekommenderad: